■3月23日，汕頭大學(xué)陳廣慧課題組等在預(yù)印本平臺(tái)ChemRxiv發(fā)表題為“Theoretical Study of the anti-NCP Molecular Mechanism of Traditional Chinese Medicine Lianhua-Qingwen Formula (LQF)”的論文，該研究首次報(bào)道了連花清瘟方作為新型冠狀病毒肺炎抑制劑的分子機(jī)制。研究指出，由于傳統(tǒng)中藥在治療新型冠狀病毒肺炎方面取得了良好的臨床療效,連花清瘟方(LQF)被納入新型冠狀病毒肺炎診療方案(第四至第七版)。LQF于2003年在中國獲得專利，用以預(yù)防和治療病毒性流感，并在2015年通過美國FDA的審核，開展第二期臨床試驗(yàn)。然而，LQF抗新型冠狀病毒肺炎的分子機(jī)制尚不清楚。該研究結(jié)果表明，LQF中的蘆丁、連翹酯苷E和金絲桃苷三種成分對(duì)新型冠狀病毒的主要蛋白酶的對(duì)接打分較大，分別為-9.1、-9.0和-8.7kcal/mol，甚至比-7.3 kcal/mol的洛匹那韋（Lopinavir）更好。同時(shí)，研究者通過分子動(dòng)力學(xué)(MD)模擬和基于MM-PBSA計(jì)算的結(jié)合自由能，驗(yàn)證了活性化合物與蛋白質(zhì)之間的結(jié)合模式。值得注意的是，這些供體-受體系統(tǒng)通過包括氫鍵和疏水性相互作用的非極性相互作用得以穩(wěn)定。最后，構(gòu)建的組分-靶標(biāo)-通路（component-target-pathway）網(wǎng)絡(luò)顯示LQF中的這些組分是提高人類免疫力（如T細(xì)胞、B細(xì)胞受體信號(hào)、自然殺傷細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性）以及抗炎癥途徑(FcεRI、ErbB、MAPK信號(hào))等的重要方式[1]。

另外，3月17日晚，廣州呼吸健康研究院、呼吸疾病國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室楊子峰課題組題為“Lianhuaqingwen exerts anti-viral and anti-inflammatory activity against novel coronavirus (SARS-CoV-2)”的研究論文被國際藥理期刊Pharmacological Research接收。該成果證實(shí)了連花清瘟膠囊通過抑制病毒復(fù)制、引起病毒顆粒形態(tài)改變及抑制宿主細(xì)胞因子表達(dá)發(fā)揮抗新冠病毒活性，為連花清瘟膠囊聯(lián)合現(xiàn)有治療手段治療COVID-2019的應(yīng)用提供依據(jù)。

研究指出目前針對(duì)新型冠狀病毒感染尚缺乏特效藥。當(dāng)前重要任務(wù)仍是盡快發(fā)現(xiàn)有安全性保證、能迅速投入救治實(shí)踐的藥物。連花清瘟膠囊是在絡(luò)病理論、“清瘟解毒，宣肺泄熱”治法指導(dǎo)下制定的處方，被國家20個(gè)指南、共識(shí)、診療方案推薦用于感冒、流感、禽流感、中東呼吸綜合征（MERS）等呼吸疾病的治療，其治療流感已通過循證醫(yī)學(xué)的驗(yàn)證。臨床研究表明連花清瘟明顯改善新型冠狀病毒肺炎疑似病例和確診病例的發(fā)熱、咳嗽、乏力和氣促等癥狀，以及降低疑似病例轉(zhuǎn)重癥比例。楊子峰團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)，連花清瘟抑制新型冠狀病毒復(fù)制的IC50為411.2μg /mL，對(duì)病毒空斑的形成也顯示出抑制活性，具有劑量依賴關(guān)系。連花清瘟干預(yù)后可見胞漿、胞內(nèi)囊泡、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和細(xì)胞膜表面的病毒顆粒減少，一部分病毒顆粒呈梭形，與病毒組細(xì)胞中的球狀病毒形成對(duì)比；進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，連花清瘟對(duì)新型冠狀病毒感染細(xì)胞引起的TNF-α、IL- 6、 CCL-2 / MCP-1、CXCL-10 / IP-10的表達(dá)具有顯著抑制作用[2]。

■3月23日，廣州市第八人民醫(yī)院的科研人員在medRxiv預(yù)印版平臺(tái)發(fā)表論文“An exploratory randomized, controlled study on the efficacy and safety of lopinavir/ritonavir or arbidol treating adult patients hospitalized with mild/moderate COVID-19 (ELACOI)”，介紹了洛匹那韋/利托那韋或阿比多爾單藥治療輕度/中度COVID-19住院成年患者的療效和安全性的隨機(jī)對(duì)照研究。

文章指出，其研究（NCT04252885）被稱為ELACOI，是一項(xiàng)探索性隨機(jī)對(duì)照研究（2：2：1），探討洛匹那韋/利托那韋（LPV/r）或阿比多爾單藥治療輕度/中度COVID-19的療效和安全性。研究結(jié)果顯示，該研究成功納入44例輕度/中度COVID-19患者，其中隨機(jī)分配21例接受LPV/r，16例接受阿比多爾治療，7例不接受抗病毒藥物治療。三組的基線特征具有可比性，LPV/r組中新型冠狀病毒核酸陽性轉(zhuǎn)化為陰性的中位時(shí)間是8.5（IQR 3，13）天，阿比多爾組是7（IQR 3，10.5）天，而對(duì)照組是4（IQR 3，10.5）天（P =0.751）。LPV/r組（42.9％，76.2％）、阿比多爾組（62.5％，87.5％）和對(duì)照組（71.4％，71.4％）的新型冠狀病毒核酸在第7天和第14天的陽性轉(zhuǎn)化為陰性的轉(zhuǎn)化率沒有顯示顯著差異。三組之間的退燒率、咳嗽緩解率、胸部CT改善率或臨床狀況惡化率均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

總體而言，LPV/r組中有5名（23.8％）患者在隨訪期間發(fā)生了不良反應(yīng)。在阿比多爾或?qū)φ战M中沒有發(fā)生明顯的不良反應(yīng)。文章得出結(jié)論：LPV/r或阿比多爾單一療法似乎對(duì)改善輕度/中度COVID-19的臨床療效效用不大，LPV/r可能導(dǎo)致更多不良反應(yīng)。值得注意的是，研究者指出由于樣本量較小的限制，將來需要進(jìn)一步驗(yàn)證[3]。

■3月23日，法國馬賽地中海感染研究中心科研人員在International Journal of Antimicrobial Agents發(fā)表論文“Hydroxychloroquine and azithromycin as a treatment of COVID-19: results of an open-label non-randomized clinical trial”。文章指出，氯喹與羥化氯喹在治療中國COVID-19患者時(shí)效果良好，鑒于此，研究旨在評(píng)價(jià)羥化氯喹在上呼吸道病毒載量中的作用。

具體來說，在一項(xiàng)36人COVID-19病人（6例無癥狀，22例有上呼吸道感染癥狀，8例有下呼吸道感染癥狀）參與的臨床實(shí)驗(yàn)中，第6天患者鼻咽拭子病毒轉(zhuǎn)陰率：接受羥氯喹和阿奇霉素聯(lián)合治療的為100％；而僅接受羥氯喹單藥治療的患者為57.1％；對(duì)照組為12.5％（p <0.001），并且與無癥狀的的患者相比，具有癥狀的患者的藥物療效更顯著。

總而言之，該研究對(duì)于治療新型冠狀肺炎患者提供了重要參考作用，但是由于樣本量小，有必要進(jìn)一步擴(kuò)大臨床試驗(yàn)，評(píng)估羥氯喹+阿奇霉素治療的臨床功效[4]。

■3月21日，Open Forum Infectious Diseases期刊在線發(fā)表了來自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院、清華大學(xué)醫(yī)學(xué)院、金銀潭醫(yī)院研究團(tuán)隊(duì)的題為“High-dose intravenous immunoglobulin as a therapeutic option for deteriorating patients with Coronavirus Disease 2019”的文章。

該文章報(bào)告了三例重度COVID-19的患者，文章指出，他們接受了大劑量靜脈注射免疫球蛋白（IVIg），恢復(fù)良好。該文章認(rèn)為，基于這些觀察結(jié)果，應(yīng)考慮開展對(duì)COVID-19的惡化患者使用大劑量IVIg的隨機(jī)研究[5]。

■3月20日，德國呂貝克大學(xué)生物化學(xué)研究所Rolf Hilgenfeld團(tuán)隊(duì)在Science在線發(fā)表題為“Crystal structure of SARS-CoV-2 main protease provides a basis for design of improved α-ketoamide inhibitors”的研究論文。冠狀病毒中最具特征的藥物靶標(biāo)之一是主要蛋白酶（Mpro，也稱為3CLpro）。與木瓜蛋白酶一樣，這種酶對(duì)于加工從病毒RNA翻譯的多蛋白是必不可少的。Mpro在大型多蛋白1ab（復(fù)制酶1ab，?790 kDa）上的不少于11個(gè)切割位點(diǎn)上運(yùn)行；大多數(shù)位點(diǎn)的識(shí)別順序是Leu-Gln↓（Ser，Ala，Gly）（↓表示切割位點(diǎn)），抑制這種酶的活性將阻止病毒復(fù)制。由于尚無具有類似裂解特異性的人蛋白酶，因此抑制劑不太可能具有毒性。

研究人員設(shè)計(jì)并合成了擬肽α-酮酰胺，作為β冠狀病毒和α冠狀病毒的主要蛋白酶以及腸病毒的3C蛋白酶的廣譜抑制劑。該研究報(bào)告了未結(jié)合的新型冠狀病毒Mpro及其與α-酮酰胺抑制劑的復(fù)合物的X射線結(jié)構(gòu)。根據(jù)結(jié)構(gòu)，研究人員將先導(dǎo)化合物開發(fā)成為新型冠狀病毒Mpro的有效抑制劑。優(yōu)化抑制劑的藥代動(dòng)力學(xué)特征顯示出明顯的肺向性和適用于通過吸入途徑給藥的適應(yīng)性。

總而言之，α-酮酰胺吸入耐受良好，小鼠未顯示任何不良反應(yīng)，這表明將化合物直接施用于肺部是可能的。鑒于這些有利的藥代動(dòng)力學(xué)結(jié)果，該研究為開發(fā)含吡啶酮的抑制劑向抗冠狀病毒藥物提供了有用的框架[6]。

■3月19日，西班牙的科研人員在The Lancet Global Health在線發(fā)表通訊文章“Use of antiviral drugs to reduce COVID-19 transmission”。文章稱即使尚未獲得抗病毒治療方面的更強(qiáng)有力的數(shù)據(jù)，在當(dāng)前COVID-19疫情暴發(fā)的情況下也需要制定緊急潛在策略，以保護(hù)高感染風(fēng)險(xiǎn)人群（尤其是近距離接觸者和醫(yī)護(hù)人員等）。采用這種方法的一個(gè)關(guān)鍵原因是，新型冠狀病毒的二次發(fā)病率在家庭（15%）和密切接觸者（10%）中很高。使用抗病毒藥物的暴露前預(yù)防和暴露后預(yù)防（PEP）在潛在暴露前或暴露于多種微生物病原體后能有效預(yù)防疾病，并降低二次感染的風(fēng)險(xiǎn)。根據(jù)PEP治療其他感染的經(jīng)驗(yàn)，文章建議在接觸者可能接觸到新型冠狀病毒后盡快開始使用PEP。例如，世衛(wèi)組織已建議將奧司他韋用于大流行性流感之前或之后具有高感染風(fēng)險(xiǎn)的人群。

癥狀發(fā)作后不久，使用的抗病毒藥物可通過減少患者呼吸道分泌物中的病毒脫落而減少對(duì)他人的傳染性（癥狀發(fā)作后5-6天左右痰中的新型冠狀病毒的病毒載量達(dá)到高峰，并持續(xù)14天），對(duì)接觸者進(jìn)行有針對(duì)性的預(yù)防性治療可以降低其被感染的風(fēng)險(xiǎn)。

文章指出實(shí)施抗病毒治療和預(yù)防有幾個(gè)要求。藥品儲(chǔ)備必須充足，治療的安全性必須非常高，理想情況下費(fèi)用應(yīng)該很低?？汞懰幜u氯喹被許可用于化學(xué)預(yù)防和治療瘧疾，以及作為可緩解疾病的抗風(fēng)濕藥。它具有在典型劑量下安全且耐受性良好的歷史。值得注意的是，該藥物在體外對(duì)冠狀病毒具有抗病毒活性，特別是新型冠狀病毒。基于觀察藥物濃度和體外藥物試驗(yàn)的藥理學(xué)模型表明，在批準(zhǔn)的劑量下用羥基氯喹預(yù)防可以預(yù)防新型冠狀病毒感染并改善病毒脫落。羥基氯喹治療COVID-19肺炎的臨床試驗(yàn)正在中國進(jìn)行（NCT04261517和NCT04307693）。研究人員正在回顧中國的成果。第一項(xiàng)研究（NCT04261517）在臨床管理方面顯示了積極的初步結(jié)果（由于樣本量小，因此尚無定論），預(yù)計(jì)不久將公布數(shù)據(jù)。

文章稱研究人員計(jì)劃進(jìn)行一項(xiàng)多中心隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)（NCT 04304053），以評(píng)估抗病毒治療對(duì)感染者的療效，以及預(yù)防性羥氯喹對(duì)所有接觸者繼發(fā)性新型冠狀病毒感染和疾病癥狀的療效。試驗(yàn)的目標(biāo)是評(píng)估重癥病例接觸者之間新型冠狀病毒的傳播性降低的程度和疾病進(jìn)展。在該研究中，新確診患有該疾病的患者將成為索引病例，圍繞該病例形成流行病學(xué)定義的接觸環(huán)。然后在開放標(biāo)簽的基礎(chǔ)上，以1:1的比例將這個(gè)環(huán)隨機(jī)分為干預(yù)組和對(duì)照組。該研究將在西班牙加泰羅尼亞地區(qū)的COVID-19暴發(fā)過程中進(jìn)行，預(yù)計(jì)在2020年5月獲得初步結(jié)果。研究者認(rèn)為如果能確定預(yù)防COVID-19的治療方法，將完全改變疫情的進(jìn)程[7]。

參考文獻(xiàn)：

[1] Chenghao Y, Meina G, Wangqiang L, Kunqian Y, Peng L, Guanghui C. Theoretical Study of the anti-NCP Molecular Mechanism of Traditional Chinese Medicine Lianhua-Qingwen Formula (LQF)2020.
[2] Runfeng L, Yunlong H, Jicheng H, et al. Lianhuaqingwen exerts anti-viral and anti-inflammatory activity against novel coronavirus (SARS-CoV-2). Pharmacological Research 2020:104761.
[3] Li Y, Xie Z, Lin W, et al. An exploratory randomized, controlled study on the efficacy and safety of lopinavir/ritonavir or arbidol treating adult patients hospitalized with mild/moderate COVID-19 (ELACOI). medRxiv 2020:2020.03.19.20038984.
[4] Gautret P, Lagier J-C, Parola P, et al. Hydroxychloroquine and azithromycin as a treatment of COVID-19: results of an open-label non-randomized clinical trial. International Journal of Antimicrobial Agents 2020:105949.
[5] Cao W, Liu X, Bai T, et al. High-dose intravenous immunoglobulin as a therapeutic option for deteriorating patients with Coronavirus Disease 2019. Open Forum Infectious Diseases 2020.
[6] Zhang L, Lin D, Sun X, et al. Crystal structure of SARS-CoV-2 main protease provides a basis for design of improved α-ketoamide inhibitors. Science 2020:eabb3405.
[7] Mitjà O, Clotet B. Use of antiviral drugs to reduce COVID-19 transmission. The Lancet Global Health.

綜合整理 | 坪山生物醫(yī)藥研發(fā)轉(zhuǎn)化中心、科研部

來源 | 南山呼吸、iNature

編輯 | 鮑啦